臺盼藍(Trypan blue)又稱錐藍或錐蟲藍等，分子式為 C34H24N6Na4O14S4，分子量為960.81，CAS Number72-57-1，是一種陰離子型染料。Trypan blue不能透過活細胞正常完整的細胞膜，故活細胞不著色，即產(chǎn)生所謂的拒染現(xiàn)象,而死亡細胞的細胞膜通透性增加，可使染料通過細胞膜進入細胞內(nèi)，使死細胞著色呈藍色，是最常用的檢測細胞活率的方法。通常認為細胞膜完整性喪失，即可認為細胞已經(jīng)死亡，這不中性紅作用相反。因此，借助臺盼藍染色可以非常簡便、快速地區(qū)分活細胞和死細胞。臺盼藍是組織和細胞培養(yǎng)中最常用的死細胞鑒定染色方法之一。

Trypan blue stain(0.4%)常用于檢測細胞膜的完整性以及細胞是否存活。活細胞不會被染成藍色，而死細胞會被染成淡藍色。臺盼藍可被巨噬細胞吞噬，故可用于巨噬細胞的活體染色劑。臺盼藍染色后，通過顯微鏡下直接計數(shù)或顯微鏡下拍照后計數(shù)，就可以對細胞存活率進行比較精確的定量，0.4%為最常用的濃度。

1、收集細胞：

如果收集貼壁細胞，應(yīng)用胰蛋白酶-EDTA溶液消化細胞，收集細胞。如果收集懸浮細胞，則可以直接收集細胞。收集好的細胞在1000～2000g離心1min，棄上清，用1ml PBS重新懸浮細胞沉淀。

2、臺盼藍染色：

吸取100μl細胞懸液到1.5ml或0.5ml離心管內(nèi)，加入100μlTrypan blue stain(0.4%)輕輕混勻，靜置染色3min(染色時間可適當延長，但不宜超過10min)。

3、細胞計數(shù)：

吸取經(jīng)過染色后的細胞，用血細胞計數(shù)板計數(shù)。通常如果要比較精確地進行定量，每個細胞樣品至少需要數(shù)500個細胞，數(shù)出藍色細胞和細胞總數(shù)。細胞存活率計算公式如下：

細胞存活率＝(細胞總數(shù)－藍色細胞數(shù))/細胞總數(shù)×100%

【注意事項】

1、Trypan blue stain對人體有輕微毒性，請注意小心防護。

2、注意凋亡小體偶爾也有臺盼藍拒染現(xiàn)象。

3、為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。